出願番号 : 特許出願平６－５７３６９ 出願日 : １９９４年３月２８日
公開番号 : 特許公開平７－２５５４７２ 公開日 : １９９５年１０月９日
出願人 : 理化学研究所 発明者 : 辻 崇一 外５名
発明の名称 : 糖鎖合成酵素の製造方法
【構成】 シアル酸転移酵素の製造方法であって、以下の工程：(a) シアル酸転移酵素を微生物中で発現させる工程；(b) 菌体内に蓄積するシアル酸転移酵素を含む蛋白凝集物または沈殿物から該酵素を 5-9 Mの尿素により抽出する工程；(c) 工程(b) で得られた抽出物を脱変性用組成物で希釈して例えば 1～4 M の尿素を含む 1次希釈物を得る工程；(d) 工程(c) で得られた 1次希釈物をさらに脱変性用組成物で希釈して例えば 0.5～2 M の尿素を含む 2次希釈物を得る工程；および(e) 工程(d) で得られた 2次希釈物から好ましくは 2価のカチオンの存在下で透析により尿素を除去して脱変性シアル酸転移酵素を得る工程を含む方法。
【効果】 シアル酸転移酵素を微生物中で大量に発現させた場合にも、菌体内の凝集物あるいは沈殿物から高度に活性の回復した酵素を大量に回収することができるので有用である。
公開番号 : 特許公開平７－２５５４７２ 公開日 : １９９５年１０月９日
出願人 : 理化学研究所 発明者 : 辻 崇一 外５名
発明の名称 : 糖鎖合成酵素の製造方法
【構成】 シアル酸転移酵素の製造方法であって、以下の工程：(a) シアル酸転移酵素を微生物中で発現させる工程；(b) 菌体内に蓄積するシアル酸転移酵素を含む蛋白凝集物または沈殿物から該酵素を 5-9 Mの尿素により抽出する工程；(c) 工程(b) で得られた抽出物を脱変性用組成物で希釈して例えば 1～4 M の尿素を含む 1次希釈物を得る工程；(d) 工程(c) で得られた 1次希釈物をさらに脱変性用組成物で希釈して例えば 0.5～2 M の尿素を含む 2次希釈物を得る工程；および(e) 工程(d) で得られた 2次希釈物から好ましくは 2価のカチオンの存在下で透析により尿素を除去して脱変性シアル酸転移酵素を得る工程を含む方法。
【効果】 シアル酸転移酵素を微生物中で大量に発現させた場合にも、菌体内の凝集物あるいは沈殿物から高度に活性の回復した酵素を大量に回収することができるので有用である。
