出願番号 : 特許出願平１１－５０３３１３ 出願日 : １９９８年６月１２日
公表番号 : 特許公表２００１－５０７２４１ 公表日 : ２００１年６月５日
出願人 : スローン―ケタリング・インスティテュート・フォー・キャンサー・リサーチ 外１名 発明者 : シューマン、スチュアート 外５名
発明の名称 : ワクシニアトポイソメラーゼにより触媒されるＲＮＡ鎖に対するＤＮＡ鎖の共有結合
本発明は、ＲＮＡ鎖に対してＤＮＡ鎖を共有結合する方法であって、（ａ）トポイソメラーゼ切断部位を含むＤＮＡ切断基質と、その部位に特異的なトポイソメラーゼとをインキュベートすることにより、トポイソメラーゼ－ＤＮＡ中間体［ここで、前記トポイソメラーゼ－ＤＮＡ中間体は１以上の５’一本鎖テールを有する］を形成することと；および（ｂ）トポイソメラーゼ－ＤＮＡ中間体の共有結合形ＤＮＡ鎖を前記ＲＮＡアクセプター鎖に対して連結でき、且つ該トポイソメラーゼを解離できる条件において、５’一本鎖テールに対して相補的なアクセプターＲＮＡ鎖を前記トポイソメラーゼ－ＤＮＡ中間体に添加することと、それにより該ＲＮＡ鎖に該ＤＮＡ鎖を共有結合するとことを具備する方法を提供する。本発明はまた、ＲＮＡ分子の５’末端にタグ付加する方法も提供する。本発明は、更に、トポイソメラーゼを使用することにより、インビトロにおいて結合されたＤＮＡ－ＲＮＡ分子を提供する。本発明はまた、ｍＲＮＡにタグを付加する方法を提供する。本発明は、キャップの形成されてないＲＮＡを除去した後に、キャップを形成したｍＲＮＡを使用して、完全長遺伝子配列を単離し且つクローニングする方法を提供する。
公表番号 : 特許公表２００１－５０７２４１ 公表日 : ２００１年６月５日
出願人 : スローン―ケタリング・インスティテュート・フォー・キャンサー・リサーチ 外１名 発明者 : シューマン、スチュアート 外５名
発明の名称 : ワクシニアトポイソメラーゼにより触媒されるＲＮＡ鎖に対するＤＮＡ鎖の共有結合
本発明は、ＲＮＡ鎖に対してＤＮＡ鎖を共有結合する方法であって、（ａ）トポイソメラーゼ切断部位を含むＤＮＡ切断基質と、その部位に特異的なトポイソメラーゼとをインキュベートすることにより、トポイソメラーゼ－ＤＮＡ中間体［ここで、前記トポイソメラーゼ－ＤＮＡ中間体は１以上の５’一本鎖テールを有する］を形成することと；および（ｂ）トポイソメラーゼ－ＤＮＡ中間体の共有結合形ＤＮＡ鎖を前記ＲＮＡアクセプター鎖に対して連結でき、且つ該トポイソメラーゼを解離できる条件において、５’一本鎖テールに対して相補的なアクセプターＲＮＡ鎖を前記トポイソメラーゼ－ＤＮＡ中間体に添加することと、それにより該ＲＮＡ鎖に該ＤＮＡ鎖を共有結合するとことを具備する方法を提供する。本発明はまた、ＲＮＡ分子の５’末端にタグ付加する方法も提供する。本発明は、更に、トポイソメラーゼを使用することにより、インビトロにおいて結合されたＤＮＡ－ＲＮＡ分子を提供する。本発明はまた、ｍＲＮＡにタグを付加する方法を提供する。本発明は、キャップの形成されてないＲＮＡを除去した後に、キャップを形成したｍＲＮＡを使用して、完全長遺伝子配列を単離し且つクローニングする方法を提供する。
