吸光度

US2015209430
"[0333] Hemoglobin content can be quantified as described previously (Schnaper, et al., J. Cell Physiol. 1993, 256:235-246; Montesano, et al., J. Cell Biol. 1983, 97:1648-1652; Stefansson, et al., J. Biol. Chem. 2000, 276:8135-8141; and Gigli, et al., J. Immunol. 1986, 100:1154-1164). The Matrigel implants are snap frozen on dry ice and lyophilized overnight. The dried implants are resuspended in 0.4 mL of 1.0% saponin (Calbiochem) for one hour, and disrupted by vigorous pipetting. The preparations are centrifuged at 14,000×g for 15 minutes to remove any particulates. The concentration of hemoglobin in the supernatant is then determined directly by measuring the absorbency at 405 nm and compared to a standard concentration of purified hemoglobin. "

[0321] ヘモグロビン含有量は、以前に記載されたように（Ｓｃｈｎａｐｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９９３，２５６：２３５−２４６；Ｍｏｎｔｅｓａｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９８３，９７：１６４８−１６５２；Ｓｔｅｆａｎｓｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０００，２７６：８１３５−８１４１；及びＧｉｇｌｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８６，１００：１１５４−１１６４）定量化することができる。マトリゲルインプラントはドライアイス上で急凍結し、一晩凍結乾燥させる。乾燥したインプラントは１時間１．０％サポニン０．４ｍＬ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）中に再縣濁し、強度のピペット処理で破壊する。調製物は１４，０００Ｘｇで１５分間遠心分離して、いかなる粒子も除去する。次いで上清中のヘモグロビン濃度を、４０５ｎｍでの吸光度を測定することによって直接決定し、精製ヘモグロビンの標準濃度と比較する。 

US2013129703
"[0587] HEK-TLR2™ or HEK-TLR 4™ cells are washed twice with PBS, trypsinized and resuspended in fresh Growth Medium (Growth Medium: DMEM, 4.5 g/L glucose, 10% heat-inactivated fetal bovine serum (30 minutes at 56° C.), 100 mg/mL ZEOCIN™, 2 mM L-glutamine). Cells are plated at a concentration of 50,000 cells/well in a 96 well plate in a total volume of 100 μL, and AARS polypeptides, controls, or AARS polypeptides (+LPS) are added to each well at the concentrations shown in the experiments outlined below. Cells are incubated at 37° C. in a 5% CO2 incubator for 18 hours. On experimental day 2, SEAP detection medium (QUANTI-BLUE™) (Invivogen Catalog code: rep-qbl) is prepared following the instructions and 120 μL is added per well to a clear flat-bottom 96-well plate, and cell supernatant is added (20 μL). Samples are incubated at 37° C. for about 30 minutes to up to 2 hours. SEAP levels are determined using a spectrophotometer and reading absorbance at 650 nM. Control wells are pretreated with PBS and known TLR agonists such as UltraPure LPS (TLR-4) or PAM3CSK4 (TLR-2). The ratio of the background subtracted [PBS plus LPS signal] to [AARS polypeptide plus LPS signal] is used to determine percent agonism. "

方法：Ｈｅｋ－ＴＬＲ２（商標）またはＨｅｋ－ＴＬＲ４（商標）細胞をＰＢＳで２回洗浄し、トリプシン処理して、新鮮な培地（増殖培地：ＤＭＥＭ、４．５ｇ／ｌのグルコース、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（５６℃で３０分）、１００ｍｇ／ｍＬのＺＥＯＣＩＮ（商標）、２ｍＭのＬ－グルタミン）中で再懸濁させる。細胞を５０，０００細胞／ウェルの濃度で、９６ウェルプレートに総体積１００μＬで播き、ＡＡＲＳポリペプチド、対照またはＡＡＲＳポリペプチド（＋ＬＰＳ）を、以下で概説する実験で示される濃度で各ウェルに加える。細胞を５％ＣＯ２インキュベーター中、３７℃で１８時間インキュベートする。実験の２日目に、ＳＥＡＰ検出培地（ＱＵＡＮＴＩ－ＢＬＵＥ（商標））（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、カタログコード：ｒｅｐ－ｑｂ１）を説明書に従って調製し、１ウェル当たり１２０μＬを透明平底９６ウェルプレートに加え、細胞上清を加える（２０μＬ）。試料を３７℃で約３０分～２時間インキュベートする。分光光度計を用いて６５０ｎＭでの吸光度を読み取り、ＳＥＡＰレベルを決定する。対照ウェルをＰＢＳおよびＵｌｔｒａＰｕｒｅ  ＬＰＳ（ＴＬＲ－４）またはＰＡＭ３ＣＳＫ４（ＴＬＲ－２）のような既知のＴＬＲアゴニストで前処理する。バックグラウンドを差し引いた［ＰＢＳ＋ＬＰＳのシグナル］と［ＡＡＲＳポリペプチド＋ＬＰＳのシグナル］の比を用いて、アゴニズムのパーセントを決定する。

US2013052318
"[01852] Spectrophotometry refers to measuring a subject's reflection or transmission of electromagnetic waves, including visible, UV, and infrared light. Spectrophotometry may, for example, be used to determine nucleic acid concentrations in a sample, such as by measuring absorbance at a wavelength of about 260, to determine protein concentration by measuring absorbance at a wavelength of about 280, and/or to determine salt concentration by measuring absorbance at a wavelength of about 230. "

分光光度法とは、可視、紫外、赤外光を含む電磁波の被験体による反射又は透過を測定することを指す。分光光度法は、例えば核酸濃度を決定するために約２６０ｎｍの波長での吸光度を測定すること、タンパク質濃度を決定するために約２８０ｎｍの波長での吸光度を測定すること、及び／又は塩濃度を決定するために約２３０ｎｍの波長での吸光度を測定することなどで使用され得る。