タンパク質の発現および精製プロトコル

タンパク質の機能と機能性タンパク質の産生の研究は、基本的にタンパク質の異種発現と精製と切り離せません。

本日は、タンパク質の発現と精製について、以下の観点からお話します。

 

1.ラベルの選択

 

現在一般的な発現タグは、Hisタグ（ヒスチジンタグ）、GSTタグ（グルタチオンスルフヒドリルトランスフェラーゼタグ）、MBPタグ（マルトース結合タンパク質タグ）、CBDタグ（キチン結合領域タグ）です。

各タグには、タグの分子量、タンパク質の溶解性を調節する能力、タンパク質の折り畳みへの影響、切除が必要かどうかなど、固有の特性があります。

精製したいタンパク質の特性に応じて、適切なラベルを選択してください。ラベルは適切に選択されており、その後の実験では半分の労力で2倍の結果が得られます。

2.ベクトル構築

 

使用するラベルを選択した後、発現ベクターを準備する必要があります。現在、Hisタグ付きのpET28シリーズやMBPタグ付きのpMALシリーズなど、多くの市販ベクターからお選びいただけます。

ほとんどのベクターシリーズには、N末端またはC末端にタグを挿入する形式が含まれており、タンパク質の特性に応じて柔軟に選択できます。

タンパク質コーディング遺伝子を挿入するときは、フレームシフトを避けるために注意を払う必要があります。ベクターを最初から作成したい場合は、適切なプロモーターと転写終結配列を挿入することを忘れないでください。プロモーター配列は一般に誘導性プロモーターを使用し、構成的プロモーターは外来タンパク質の時期尚早な発現および蓄積を引き起こし、これは宿主の増殖を助長しない。

 

3.ホストの選択

 

一般的な宿主は、大腸菌、哺乳類細胞、酵母、昆虫です。大腸菌の場合、異種発現に最も適した株はBL21とその派生株ですが、ベクターで選択された転写および翻訳要素に従って選択する必要があります。

 

BL21の内因性プロテアーゼ遺伝子が欠落しているため、外来タンパク質の発現に適した株ですが、T7 RNAポリメラーゼがないため、T7プロモーターを含むタンパク質の発現には使用できません。 BL21（DE3）、BL21ではT7ファージゲノムの統合に基づいており、pETシリーズなどのT7発現システムに適しています。 BL21（DE3）に基づくBL21（DE3）PLySsは、T7ポリメラーゼの発現をより厳密に制御できるT7リゾチーム遺伝子を持っています。

 

エンドヌクレアーゼ（endA1）リコンビナーゼ（recA1）などの遺伝子が存在するため、プラスミドはBL21シリーズの菌株ではそれほど安定しておらず、ゲノム、喪失、変異などに組み込まれている可能性があることに注意してください。したがって、優れたベクターを構築します。DH5αなどの株に保存する必要があります。

 

4.培養条件の最適化

 

大腸菌発現システムを例にとると、LB培地は蘇生と種子培養の両方に使用できます。

タンパク質の合成と蓄積を促進するために、TB培地など、発酵段階ではアミノ酸含有量は多いが糖源が少ない培地を使用することをお勧めします。

誘導性プロモーターを使用する場合は、細菌が対数増殖後期に増殖するときにIPTGなどの誘導物質を追加する必要があります。

インデューサーを加えた後、培養温度を16〜30℃に下げる必要があります。培養温度が低いほど、タンパク質の蓄積が遅くなり、封入体が生成される可能性が低くなります。

 

5.精製カラムの材料の選択

各ラベルには、対応する精製カラム材料があります。 GSTタグはグルタチオンゲルを使用し、MBPタグは多糖類樹脂を使用し、CBDタグはキチン樹脂を使用し、Hisタグは二価金属イオンと結合したフィラーを使用します。最も一般的なものはニッケルイオン（一般にニッケルカラムとして知られています）と結合しています。

NEBExpressニッケルカラムパッキング（S1428S）は、2019年11月に新たに発売されました。また、スクリーニング段階での小タンパク質精製により適した、プレパックされたスピンカラムフォーム（S1427S / L）もあります。 1mgのHis標識タンパク質の精製には15分しかかかりません。

1 mlのニッケルカラムパッキングごとに、10mg以上のヒスチジンタグタンパク質を精製できます。

Hisタグ付きタンパク質への非常に特異的な結合、分離および精製後の純度> 95％。

強力なニッケルイオン結合により、EDTAおよび還元剤に対して非常に耐性があり、一般的な界面活性剤ベースの細胞溶解試薬と互換性があります。

カスタマイズされたタンパク質発現および精製サービス

生命科学や医学などの研究分野で広く利用されているバイオ医薬品や組換えタンパク質発現技術の開発に伴い、低コスト、短期間、高純度の活性タンパク質の需要も高まっています。組換えタンパク質の発現に使用される従来の宿主細胞は、通常、原核細胞、酵母細胞、バキュロウイルス、大腸菌、昆虫細胞、および哺乳動物細胞などの発現系に由来する。

 

General Biosystemsは、業界をリードするコドン最適化ソフトウェアと10年以上の専門的なタンパク質発現および精製の経験の助けを借りて、完全な合成生物学プラットフォームに基づいて、ミリグラムからグラムの高さのカスタマイズされたタンパク質発現サービスを世界中の科学者に提供します純度活性。私たちは高品質のタンパク質生産に焦点を当てており、経済的および時間的コストを効果的に節約できます。

 

カスタマイズされたタンパク質発現サービスコンテンツ：

コドン最適化：特許取得済みソフトウェアの無料最適化、主要な最適化パラメーター設定

原核生物タンパク質のカスタマイズされた発現：主要な配列最適化およびアセンブリプラットフォーム、数千のベクターの自由な選択

原核生物タンパク質の発現の保証：特許取得済みのベクターと組み合わせたコドン最適化技術により、95％を超える発現成功率が保証されます

酵母タンパク質のカスタム発現：ほとんどのタンパク質を翻訳後修飾できる真核生物の発現システム

バキュロウイルス-昆虫細胞の発現：大きな断片や毒性タンパク質の発現に適しており、生産規模は500Lに達する可能性があります

哺乳類細胞の発現：独自のシグナルペプチドライブラリ、最適化された発現条件、ミリグラムからグラムまでの組換えタンパク質の生産

 

タンパク質発現システム選択リファレンス：

	大腸菌発現システム	酵母発現システム	バキュロウイルス-昆虫細胞発現システム	哺乳類細胞発現システム
dvantage	生産時間は短く、コストは低く、生産のスケールアップも簡単です。菌株の遺伝的背景は明らかです。	生産時間は短いです。真核生物の発現システムは、ほとんどのタンパク質を翻訳後修飾することができます。	DNAの大きな断片やいくつかの毒性タンパク質の発現に適しています。 ほとんどのタンパク質の折りたたみと翻訳後修飾	すべてのタンパク質を折りたたむことができ、最も自然な翻訳後修飾
DISA dvantage	翻訳後修飾はありません。封入体を形成しやすい。	酵母自体が分泌するプロテアーゼは、標的タンパク質を分解する可能性があります。 グリコシル化は哺乳類細胞とは異なります	高コスト;生産を拡大するのは難しい。	高コスト
推奨用途	抗原;タンパク質標準;機能研究;構造研究;	ワクチン; グリコシル化研究; 分泌タンパク質の発現;	グリコシル化研究; 活動分析; 分泌タンパク質の発現;	機能研究 構造研究 活動分析; 分泌タンパク質の発現;

タンパク質発現サービスオーダー

Eメール：詳細な要件をinfo@generalbiosystems.comに送信してください

電話での注文：フリーダイヤルのホットライン888-778-6481に直接電話して、経験豊富なエンジニアに連絡することができます。

タンパク質の発現および精製プロトコル

タンパク質の機能と機能性タンパク質の産生の研究は、基本的にタンパク質の異種発現と精製と切り離せません。

本日は、タンパク質の発現と精製について、以下の観点からお話します。

 

1.ラベルの選択

 

現在一般的な発現タグは、Hisタグ（ヒスチジンタグ）、GSTタグ（グルタチオンスルフヒドリルトランスフェラーゼタグ）、MBPタグ（マルトース結合タンパク質タグ）、CBDタグ（キチン結合領域タグ）です。

各タグには、タグの分子量、タンパク質の溶解性を調節する能力、タンパク質の折り畳みへの影響、切除が必要かどうかなど、固有の特性があります。

精製したいタンパク質の特性に応じて、適切なラベルを選択してください。ラベルは適切に選択されており、その後の実験では半分の労力で2倍の結果が得られます。

2.ベクトル構築

 

使用するラベルを選択した後、発現ベクターを準備する必要があります。現在、Hisタグ付きのpET28シリーズやMBPタグ付きのpMALシリーズなど、多くの市販ベクターからお選びいただけます。

ほとんどのベクターシリーズには、N末端またはC末端にタグを挿入する形式が含まれており、タンパク質の特性に応じて柔軟に選択できます。

タンパク質コーディング遺伝子を挿入するときは、フレームシフトを避けるために注意を払う必要があります。ベクターを最初から作成したい場合は、適切なプロモーターと転写終結配列を挿入することを忘れないでください。プロモーター配列は一般に誘導性プロモーターを使用し、構成的プロモーターは外来タンパク質の時期尚早な発現および蓄積を引き起こし、これは宿主の増殖を助長しない。

 

3.ホストの選択

 

一般的な宿主は、大腸菌、哺乳類細胞、酵母、昆虫です。大腸菌の場合、異種発現に最も適した株はBL21とその派生株ですが、ベクターで選択された転写および翻訳要素に従って選択する必要があります。

 

BL21の内因性プロテアーゼ遺伝子が欠落しているため、外来タンパク質の発現に適した株ですが、T7 RNAポリメラーゼがないため、T7プロモーターを含むタンパク質の発現には使用できません。 BL21（DE3）、BL21ではT7ファージゲノムの統合に基づいており、pETシリーズなどのT7発現システムに適しています。 BL21（DE3）に基づくBL21（DE3）PLySsは、T7ポリメラーゼの発現をより厳密に制御できるT7リゾチーム遺伝子を持っています。

 

エンドヌクレアーゼ（endA1）リコンビナーゼ（recA1）などの遺伝子が存在するため、プラスミドはBL21シリーズの菌株ではそれほど安定しておらず、ゲノム、喪失、変異などに組み込まれている可能性があることに注意してください。したがって、優れたベクターを構築します。DH5αなどの株に保存する必要があります。

 

4.培養条件の最適化

 

大腸菌発現システムを例にとると、LB培地は蘇生と種子培養の両方に使用できます。

タンパク質の合成と蓄積を促進するために、TB培地など、発酵段階ではアミノ酸含有量は多いが糖源が少ない培地を使用することをお勧めします。

誘導性プロモーターを使用する場合は、細菌が対数増殖後期に増殖するときにIPTGなどの誘導物質を追加する必要があります。

インデューサーを加えた後、培養温度を16〜30℃に下げる必要があります。培養温度が低いほど、タンパク質の蓄積が遅くなり、封入体が生成される可能性が低くなります。

 

5.精製カラムの材料の選択

各ラベルには、対応する精製カラム材料があります。 GSTタグはグルタチオンゲルを使用し、MBPタグは多糖類樹脂を使用し、CBDタグはキチン樹脂を使用し、Hisタグは二価金属イオンと結合したフィラーを使用します。最も一般的なものはニッケルイオン（一般にニッケルカラムとして知られています）と結合しています。

NEBExpressニッケルカラムパッキング（S1428S）は、2019年11月に新たに発売されました。また、スクリーニング段階での小タンパク質精製により適した、プレパックされたスピンカラムフォーム（S1427S / L）もあります。 1mgのHis標識タンパク質の精製には15分しかかかりません。

1 mlのニッケルカラムパッキングごとに、10mg以上のヒスチジンタグタンパク質を精製できます。

Hisタグ付きタンパク質への非常に特異的な結合、分離および精製後の純度> 95％。

強力なニッケルイオン結合により、EDTAおよび還元剤に対して非常に耐性があり、一般的な界面活性剤ベースの細胞溶解試薬と互換性があります。

New use of eggs: can extract protein used to treat cancer

Eggs are a kind of food that people are very familiar with. Eggs have high nutritional value and are a good source of high-quality protein and B vitamins. 

They can also provide a certain amount of fat, vitamin A and minerals. In addition to eating, eggs may also have big uses in the pharmaceutical field: early scientists have used eggs to produce vaccines, but the latest research scientists have successfully tried to extract proteins with powerful anti-cancer and anti-viral effects from eggs.

 

 

In a new study, researchers genetically engineered hens to produce several types of cytokines: interferon alpha 2a (IFNalpha2a) and two types (human and pig) fusion colony stimulating factor (CSF1) protein . 

IFNalpha2a has antiviral properties and can also be used for cancer treatment; and CSF1 has great potential in the process of tissue repair.

 

In order to cultivate these cytokines, the researchers coded them into the hen's DNA so that the protein would form part of the protein. 

Then, researchers can easily extract cytokines through a simple protein purification system. The research team pointed out that this method will not affect the health of the hens, and that mass production of therapeutic cytokines will be a more cost-effective method because only three eggs are needed to produce a usable dose.

Dr. Ceri Lyn-Adams, Head of Health Sciences Strategy for Swindon Biosciences, UK, believes: "These recent research results provide promising evidence for the potential of more economical, protein-based drugs for future drug discovery and development."

This protein extraction technology research can be used not only in the treatment of human diseases, but also in other fields such as animal health and scientific research.

您知道彩钢夹芯板のこれらの小知识吗

着色コアプレートは、今のところ世界で最も支持されている新素材である可能性があります。

これらは技術レベルが高くなく、保護されています。

これは通常、大型工場、超市、医院、体育館などで使用されます。

彩钢夹芯板介绍
彩芯は、現在の建築材料で最も一般的な製品であり、優れた難燃性と遮音性を備えておらず、高い効果を保証しています。

 

彩色されたコアプレートは、取り付けが簡単で、重量があり、保護されており、効率の高い閉じ込められた気泡分子が水を防ぐことができる。 蒸気凝結。

核心材料の面では、カラーコアプレートを6種類に分けます。 。

様々な材料のコアプレートの機能は異なっており、発色性の高い耐火性および高い機械的強度を有しており、それらは用途の広いものである。 潜力巨大な高効率は建築材料を保護します。

彩钢夹芯板报価

彩色された芯板の価格は、例えば、板の材料と厚さに依存し、70要素から100要素までの高さで、100平方メートル以上である。

彩色コアプレートの厚さは、5センチメートル、10センチメートル、15センチメートル、25センチメートルです。センチメートルの値は、55要素から90要素まで異なります。 価格は70から100元まで等。

コアプレートの厚さもまた、最初に定義する必要があります。