PLBの作成とPLBへの抗原のテザリング

図1システム設計。示されているのは、図の下に示されているTIRFMリグコンポーネントの一般化された図です。光ファイバーケーブルの右側にあるすべての光学コンポーネントは、標準のポストマウントのネジで金属製ブレッドボードに取り付けられています。 3つのレーザー（右側のボックス）を使用して、5つの使用可能な励起線（nm単位の波長が示されています）を提供します。主鏡で反射した後、アルゴンレーザーラインはダイクロイックミラー（DC1）を介してAOTFに送られます。 krypton-argonラインはDC1とDC2の両方を通過します。主ミラーで反射した後、440 nmのダイオードレーザーラインは、DC2を介してAOTFに送られます。 440 nmレーザーヘッドの出力はコンピューター制御です。コントロールボックスは、コンピューターソフトウェアとのインターフェイスに必要であり、黒いボックスとして描かれています。図の下部にある細い黒い線は、コンピューターの接続を示します。 AOTFと励起フィルターホイール（FW）はそれぞれのコントロールボックスにリンクされており、コントロールボックスはPCワークステーションに接続され、MetaMorph取得ソフトウェアによって制御されます。選択されたラインは、レーザーローンチ（LL）レンズに向けられ、光ファイバーケーブルへの進入を可能にします。光ファイバーケーブルは、TIRFイルミネーター（TIRFIL）に接続されています。TIRF角度は、電動アクチュエーター（ACT）を介してソフトウェアで制御されます。

励起光源

連続波レーザーは、TIR FMシステムに照明源を提供します。一般的なレーザーの種類には、ガス、ダイオードポンプ、ストレートダイオードがあります。すべてを組み合わせて使用​​できます。レーザーは光学ブレッドボードに取り付けられており、極性と垂直ビームの高さが一致しているため、図2に模式的に示すように、顕微鏡のTIRFMイルミネーターに光を運ぶシングルモード光ファイバーケーブルに組み合わせることができます。

混合ガスレーザーは、単一のデバイスから複数のレーザーラインを取得する経済的な手段を提供します。波長の選択は、ソフトウェア制御の音響光学チューナブルフィルター（AOTF）を使用して行われます。 AOTFの不十分なブロッキングパワーとガスレーザーが複数の使用可能な（そして使用不可能な波長を生成する）という事実により、外来の励起光は、「クリーンアップ」励起フィルターを備えたTIRFMで使用される非常に敏感なカメラに到達しないようにブロックする必要があります。システムでは、クリーンアップフィルターは、AOTFの後にブレッドボード上のソフトウェア制御フィルターホイール（FW）に配置され、汎用性を提供し、ダイクロイックビームスプリッターハウジング内の従来の場所に配置された場合に発生する反射アーティファクトを回避します。（関連製品：ファイバー光スプリッターボックス）

ストレートダイオードおよびダイオードポンプソリッドステートレーザーは、サイズを最大10倍小さくすることができ、ガス駆動の同等物と比較してノイズと熱のない代替品です。ストレートダイオードレーザーは、チューブを（通常は全コストの3分の1で）交換する必要があるガスレーザーと比較して、2〜3年の寿命が長くなっています。ストレートダイオードは、AOTFの必要性を迂回してソフトウェア制御でモデル化できるため、レーザーヘッドで光ファイバーケーブルに直接リンクすることも、システムの場合のように、光ファイバーカプラーに直接ミラーリングすることもできます。通常のダイオードレーザーの正方形のビーム形状は、通常、光ファイバー結合のポイントでパワースループットの不可避で重大な損失をもたらすことに注意することが重要です。ダイオードポンプレーザーは、別の技術を使用して単色ラインを生成し、その出力はAOTFを介してモデル化する必要があります。