プラスミドＤＮＡの精製方法及びプラスミドＤＮＡ精製用キット

出願番号 特願2005-192605 公開番号 特開2007-006799
出願日 平成１７年６月３０日（２００５．６．３０）
公開日 平成１９年１月１８日（２００７．１．１８）
発明者 赤池 敏宏・チョウドリー、 エズハルル ホック
出願人 国立大学法人東京工業大学

発明の概要 【課題】 高純度のプラスミドＤＮＡを簡便に且つ短時間で、大量に精製することが可能なプラスミドＤＮＡの精製方法を提供する。
【解決手段】 細菌細胞をＴｒｉｓ－ＥＤＴＡバッファで懸濁し、さらに、ＮａＯＨと両イオン性界面活性剤である３－(ドデシルジメチル－アンモニオ)プロパンスルホン酸塩とを含んだ溶解バッファを加え、細胞を溶解する。次に、細胞溶解液にＴｒｉｓバッファを加えて遠心分離することにより、プラスミドＤＮＡ、ＲＮＡ、及び一部のタンパク質が緩やかに結合したタンパク質凝集体を沈殿させる。そして、沈殿物をＴｒｉｓバッファで洗浄してタンパク質凝集体からＲＮＡを除き、さらに、沈殿物にＴＥバッファ又は水を加え、タッピング又はボルテックスミキサで撹拌することにより、タンパク質凝集体からプラスミドＤＮＡを溶出させる。最後に、遠心分離し、上清を回収することによりプラスミドＤＮＡを得る。 J-Store >> 特許コード P06P004268